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小鼠elisa试剂盒在实验前的准备工作

发布时间:2020-12-28 点击量:39
  小鼠elisa试剂盒是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
  
  小鼠elisa试剂盒的实验原理:
  将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入微生物化的目标抗体,将未结合的生物素抗体洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。

  实验前的准备工作:
  1、准备好所有实验额外所需物品,如试管 吸头 移液器 离心机等;
  2、确定试剂盒在有效期内;
  3、仔细阅读说明书;
  4、按说明书确定所有试剂齐全(数量 体积);
  5、标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份;
  6、根据检测标本数量确定所需试剂的量;
  7、按说明书将所用试剂盒平衡至室温,配制所需试剂。
  
  小鼠elisa试剂盒注意事项:
  1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存;
  2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果;
  3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使排枪加样;
  4、请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计3算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6、底物请避光保存。
  7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
  8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  9、本试剂不同批号组分不得混用。
  10、如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

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