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关于人核仁素(NCL)试剂盒的检测程序,这里有详细介绍

发布时间:2021-07-27 点击量:61
  人核仁素(NCL)试剂盒能对血清、血浆,细胞上清液及其它相关液体样本定量检测抗原,定性检测特异性抗体。优质的试剂,先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。
 
  人核仁素(NCL)试剂盒的实验原理:
  将NCL抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的NCL与连接于固相载体上的抗体结合,然后加入生物素化的NCL抗体,将未结合的生物素化抗体洗净后,加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的NCL呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
 
  人核仁素(NCL)试剂盒的检测程序:
  1、微孔板使用前洗板2次,向滤纸印干后,请立即使用。
  2、加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板混匀后置37℃,90分钟,然后甩去酶标板内液体,向滤纸上印干,不洗板。
  3、每孔加入1x的生物素化抗体工作液100ul,混匀后置37℃,60分钟。
  4、洗板:用洗涤液将微孔板充分洗涤3次,向滤纸上印干。
  5、每孔加入1x的ABC复合物工作液100ul,混匀后置37℃,30分钟。
  6、洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤5次,向滤纸上印干。
  7、每孔加入底物工作液90ul,混匀后置37℃暗处反应3-20分钟(具体显色时间根据显色结果而定)。
  8、每孔加入50ul终止液,混匀,30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
 
  结果判断与计算:
  1、所有OD值建议减除空白值后再行计算,如空白OD低于0.1, 也可以直接计算。
  2、以标准 品浓度作横坐标, OD值作纵坐标,手工绘制或用软件绘制标准曲线,根据样品OD值计算出相应含量,再乘上稀释倍数即可。